Defne Kayalar, 7 Mayıs 1975'te İzmir'de dünyaya geldi. 1996'da Bilkent Üniversitesi Grafik bölümünü bitiren Kayalar, ardından Bilgi Üniversitesi Sinema-TV bölümünde asistanlık yaparak sektöre adım attı. Ekran yüzü olarak tanınmadan önce yıllarca sahne gerisinde üretim süreçlerine katkı sundu; kariyerinin ilk döneminde Uğur Yücel ile de çalışma fırsatı buldu.
Yapımcılık Yılları
Kayalar, 2003'te Uğur Yücel'in yönettiği Alacakaranlık dizisinin yapım sürecinde yer aldı; aynı dönemde Yazı Tura filminin yapımcılığını üstlendi. 2006'da ise Hayatımın Kadınısın sinema filminde genel koordinatörlük görevini yürüttü. Bu yıllar boyunca kamera önünden çok kamera arkasında şekillendi profesyonel kimliği.
Oyunculuğa Geçiş
2010 yılında Keskin Bıçak dizisiyle ilk kez oyuncu olarak ekrana çıktı. Üç yıl sonra, Ali Bilgin'in yönettiği 20 Dakika'da Derin Solmaz karakterini hayata geçirdi; bu projede Tuba Büyüküstün ve İlker Aksum gibi isimlerle yan yana geldi. 2014'te Medcezir'de konuk oyuncu olarak Sedef Kaya rolünü üstlendi. Yönetmen Ali Bilgin ile 2014 Aralık ayında evlendi; 2016'nın başında çocukları oldu.
2015'te eşinin yönettiği Delibal filminde rol aldı; filmin kadrosunda Çağatay Ulusoy ve Leyla Lydia Tuğutlu da vardı. 2017'de Puhu TV'nin yayınladığı Fi dizisinde Aylin karakterini canlandırdı. Aynı yıl Yol Ayrımı filmiyle sinema yolculuğunu sürdürdü.
Son Dönem Çalışmaları
2018'de Netflix yapımı Hakan: Muhafız'da Suzan Bayraktar rolüyle uluslararası platformlarda görücüye çıktı. 2020'de eleştirmen beğenisi kazanan Bir Başkadır dizisinde Peri karakteriyle güçlü bir performans sergiledi. 2021 yılında ise Kuş Uçuşu, Saklı ve Menajerimi Ara yapımlarında izleyiciyle buluştu. Yapımcılıktan oyunculuğa uzanan kariyeri, Türk ekranlarının farklı dönemlerine damgasını vurdu.